然而，與其他檢驗(yàn)方法不同，微生物學(xué)檢測(cè)有其自身的特殊性和復(fù)雜性。

• 第一，檢測(cè)的對(duì)象大多是活的微生物，離體后容易死亡，標(biāo)本需要及時(shí)處理；

• 第二，標(biāo)本中的病原微生物是未知的，具有傳染性，存在生物安全隱患；

• 第三，引起人類(lèi)感染的微生物種類(lèi)繁多，檢測(cè)方法復(fù)雜，對(duì)檢測(cè)人員的技術(shù)水平要求較高。

目前我國(guó)基層實(shí)驗(yàn)室存在儀器設(shè)備簡(jiǎn)單陳舊，檢驗(yàn)質(zhì)量缺乏保證，操作程序不規(guī)范，操作人員沒(méi)有受過(guò)正規(guī)培訓(xùn)等問(wèn)題。微生物學(xué)檢驗(yàn)是臨床檢驗(yàn)中的“短板”，一些二級(jí)醫(yī)院尚未建立微生物實(shí)驗(yàn)室或不能開(kāi)展必要的檢驗(yàn)項(xiàng)目。為了規(guī)范臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室硬件和軟件建設(shè)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)微生物學(xué)組委員和國(guó)家衛(wèi)計(jì)委臨床檢驗(yàn)中心專家共同討論制定了本共識(shí)。

臨床微生物實(shí)驗(yàn)室（以下簡(jiǎn)稱微生物室）應(yīng)有足夠的空間進(jìn)行試驗(yàn)操作和結(jié)果報(bào)告。根據(jù)我國(guó)目前的現(xiàn)狀，大多數(shù)微生物室僅從事細(xì)菌培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗(yàn)，建議二級(jí)醫(yī)院使用面積最好不低于60m2，三級(jí)醫(yī)院不低于160m2（如果同時(shí)開(kāi)展感染性免疫檢驗(yàn)，則面積相應(yīng)擴(kuò)大）。設(shè)置防蟲(chóng)紗窗和門(mén)禁，并按檢測(cè)功能進(jìn)行相對(duì)分區(qū)，如分為標(biāo)本處理、涂片鏡檢、分離培養(yǎng)、鑒定／藥敏、培養(yǎng)基制備和結(jié)果報(bào)告等區(qū)域。三級(jí)醫(yī)院應(yīng)有獨(dú)立的分枝桿菌和真菌檢測(cè)室。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)要有充足的照明，宜有適當(dāng)?shù)慕o排水管道、良好的通風(fēng)設(shè)施和完善的信息管理系統(tǒng)。

1.二級(jí)醫(yī)院微生物室必備的儀器設(shè)備有：生物安全柜、高壓消毒滅菌器、紫外燈、試劑冰箱、低溫冰箱、普通培養(yǎng)箱（至少２個(gè)溫度）、顯微鏡、比濁計(jì)、燭缸、離心機(jī)等。有條件或標(biāo)本量較多的醫(yī)院應(yīng)配備血培養(yǎng)儀、半自動(dòng)／全自動(dòng)微生物分析儀。

2.三級(jí)醫(yī)院微生物室必須增加配備的儀器設(shè)備有：血培養(yǎng)儀、自動(dòng)微生物分析儀、濁度儀、ＣＯ２培養(yǎng)箱、細(xì)胞離心機(jī)、熒光顯微鏡等。

根據(jù)標(biāo)本量和所開(kāi)展的檢驗(yàn)項(xiàng)目，有條件的微生物室可配備（但不限于）：自動(dòng)染片機(jī)、標(biāo)本自動(dòng)接種儀、基質(zhì)輔助激光解吸電離－飛行時(shí)間質(zhì)譜儀、基因診斷平臺(tái)（包括擴(kuò)增儀、測(cè)序儀等）、冷凍干燥機(jī)、化學(xué)發(fā)光儀、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)等設(shè)備。

根據(jù)我國(guó)目前的現(xiàn)狀，二級(jí)醫(yī)院微生物室至少有固定人員２～３人，建議５人及以上，其中實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人至少為中級(jí)技術(shù)職稱，有臨床醫(yī)學(xué)或檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)習(xí)背景，并有在三級(jí)醫(yī)院微生物室進(jìn)修６個(gè)月以上的經(jīng)歷和３年以上臨床微生物工作經(jīng)驗(yàn)，有持續(xù)學(xué)習(xí)的熱情和能力，且每２年至少外出學(xué)習(xí)或進(jìn)修培訓(xùn)１次。

三級(jí)醫(yī)院微生物室至少有固定人員６～８人，建議１０人及以上，其中實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人至少為副高技術(shù)職稱，有臨床醫(yī)學(xué)或檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專業(yè)本科或以上學(xué)歷，有５年以上臨床微生物工作經(jīng)驗(yàn)，并有持續(xù)學(xué)習(xí)的熱情和能力，且每年至少外出學(xué)習(xí)或進(jìn)修培訓(xùn)１次。

進(jìn)入微生物實(shí)驗(yàn)室工作的人員應(yīng)經(jīng)過(guò)專業(yè)技術(shù)、醫(yī)院感染知識(shí)和生物安全培訓(xùn)。有顏色視覺(jué)障礙的人員不應(yīng)從事涉及辨色的微生物學(xué)檢驗(yàn)。從事特殊崗位檢驗(yàn)，如性病、ＨＩＶ、結(jié)核菌和基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的人員應(yīng)通過(guò)相應(yīng)的崗位培訓(xùn)，并具有上崗資格證。

?微生物室專業(yè)組長(zhǎng)應(yīng)對(duì)新入崗人員進(jìn)行培訓(xùn)、并定期（至少每６個(gè)月１次）對(duì)在崗人員進(jìn)行評(píng)估考核。對(duì)由多個(gè)人員進(jìn)行的手工檢驗(yàn)項(xiàng)目（如顯微鏡檢查、培養(yǎng)結(jié)果判讀、抑菌圈測(cè)量、結(jié)果報(bào)告等）應(yīng)進(jìn)行人員比對(duì)。

?重點(diǎn)要求能夠通過(guò)染色鏡檢和分離培養(yǎng)等技術(shù)及時(shí)發(fā)現(xiàn)標(biāo)本中所存在的病原菌。

1.染色鏡檢：能夠進(jìn)行革蘭染色、抗酸染色、墨汁染色和乳酸棉酚蘭染色等，并識(shí)別常見(jiàn)病原菌。

2.細(xì)菌培養(yǎng)：能夠采用手工方法或血培養(yǎng)儀對(duì)血液及無(wú)菌體液進(jìn)行增菌培養(yǎng)。能夠根據(jù)需要對(duì)各類(lèi)標(biāo)本進(jìn)行普通細(xì)菌培養(yǎng)、苛氧菌培養(yǎng)（可使用燭缸）、厭氧菌（可使用厭氧袋或厭氧罐）和真菌培養(yǎng)。

3.細(xì)菌鑒定：可采用全自動(dòng)、半自動(dòng)或手工方法（如編碼方法）對(duì)臨床常見(jiàn)的需氧菌、兼性厭氧菌、苛氧菌和酵母菌鑒定到種或?qū)俚乃?；?duì)于厭氧

菌可僅報(bào)告革蘭染色性和細(xì)菌形態(tài)。

4.藥敏試驗(yàn)：能夠?qū)εR床常見(jiàn)細(xì)菌進(jìn)行規(guī)范化的藥敏試驗(yàn)，并報(bào)告敏感／中介／耐藥結(jié)果。

5.免疫學(xué)檢測(cè)：根據(jù)臨床需要和科室工作安排，可進(jìn)行病原菌抗原或抗體檢測(cè)（如肝炎病毒抗原抗體檢測(cè)）。

1.染色鏡檢：能開(kāi)展六胺銀染色、免疫熒光染色和其他特殊染色。

2.細(xì)菌鑒定：能夠?qū)⒎蛛x的細(xì)菌（包括分枝桿菌、常見(jiàn)絲狀真菌、厭氧菌）鑒定到種或?qū)偎健?/p>

3.藥敏試驗(yàn)：能夠開(kāi)展苛氧菌、厭氧菌和酵母菌的藥敏試驗(yàn)。

4.非培養(yǎng)診斷技術(shù)：根據(jù)臨床需求可使用PCR、基因測(cè)序、芯片、質(zhì)譜等技術(shù)進(jìn)行病原菌鑒定／分型／耐藥性檢測(cè)和同源性分析?？砷_(kāi)展病原體血清免疫學(xué)檢測(cè)、降鈣素原、真菌－（1,3）－β－D－葡聚糖檢測(cè)、真菌半乳甘露聚糖檢測(cè)、結(jié)核Ｔ細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)等項(xiàng)目。

1.檢驗(yàn)申請(qǐng)單的設(shè)計(jì)和應(yīng)用：由于微生物學(xué)檢驗(yàn)的特殊性，所以檢驗(yàn)申請(qǐng)單除常規(guī)信息外還應(yīng)包括：標(biāo)本采集方法（如中段尿、導(dǎo)尿、膀胱穿刺尿等）、采集部位、采集時(shí)間、采集前是否已使用抗菌藥物、臨床擬診感染類(lèi)型和（或）可疑目標(biāo)菌等信息。

2.標(biāo)本采集的指導(dǎo)和培訓(xùn)：通過(guò)編寫(xiě)《微生物標(biāo)本采集手冊(cè)》（供醫(yī)護(hù)人員使用），《痰、尿、便標(biāo)本采集和送檢須知》（供患者使用），配合多媒體及視頻宣傳等多種形式進(jìn)行標(biāo)本采集方法指導(dǎo)和培訓(xùn)，提高有價(jià)值的標(biāo)本（如血液和無(wú)菌體液）以及合格標(biāo)本的送檢率，對(duì)不合格標(biāo)本應(yīng)及時(shí)反饋，并根據(jù)需要進(jìn)行溝通和再培訓(xùn)。

3.標(biāo)本運(yùn)送：

（1）所有標(biāo)本均應(yīng)視為有潛在生物危險(xiǎn)，運(yùn)送過(guò)程中應(yīng)防止溢出；

（2）應(yīng)根據(jù)標(biāo)本中的疑似病原菌選擇適宜的運(yùn)送培養(yǎng)基和保溫措施；

（3）所有標(biāo)本均應(yīng)盡快運(yùn)送（在２ｈ內(nèi)），特殊標(biāo)本（如厭氧培養(yǎng)標(biāo)本、腦脊液標(biāo)本）應(yīng)立即運(yùn)送。

4.標(biāo)本驗(yàn)收：除常規(guī)的驗(yàn)收程序以外，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注：

（1）送檢標(biāo)本的容器是否為無(wú)菌、封閉、無(wú)泄漏；

（2）標(biāo)本類(lèi)型是否與申請(qǐng)項(xiàng)目相符合（如痰液標(biāo)本申請(qǐng)項(xiàng)目為厭氧培養(yǎng)，則為不合格）；

（3）肉眼觀察標(biāo)本性質(zhì)是否合格（如送檢的拭子已干燥，送檢

的痰標(biāo)本為唾液等為不合格）；

（4）標(biāo)本送檢時(shí)間是否已超過(guò)允許范圍。對(duì)不合格的標(biāo)本應(yīng)及時(shí)進(jìn)行登記和反饋。

1.染色鏡檢：

（1）能夠根據(jù)檢驗(yàn)申請(qǐng)、標(biāo)本類(lèi)型及可疑的病原菌種類(lèi)選擇正確的染色方法（如懷疑隱球菌性腦膜炎，選擇墨汁染色）。

（2）對(duì)痰標(biāo)本應(yīng)進(jìn)行涂片革蘭染色，判斷標(biāo)本質(zhì)量，觀察細(xì)菌分布。

（3）至少每周用已知的陽(yáng)性和陰性質(zhì)控菌株進(jìn)行１次質(zhì)控（若檢測(cè)頻率小于每周１次，則在實(shí)驗(yàn)當(dāng)日進(jìn)行質(zhì)控）。

2.細(xì)菌分離培養(yǎng)：

（1）能夠根據(jù)檢驗(yàn)申請(qǐng)信息、標(biāo)本類(lèi)型及可疑的病原菌選擇正確的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件（如培養(yǎng)溫度、氣體環(huán)境和培養(yǎng)時(shí)間）。

（2）每一批培養(yǎng)基（包括自制或購(gòu)買(mǎi)）均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量和性能驗(yàn)證（無(wú)菌試驗(yàn)、生長(zhǎng)試驗(yàn)、必要時(shí)做生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)和生化反應(yīng)）。記錄培養(yǎng)基制備過(guò)程（僅對(duì)自制培養(yǎng)基）、生產(chǎn)日期、有效期、外觀和性能驗(yàn)證結(jié)果。

應(yīng)在有效期內(nèi)使用。

（3）能正確判別各類(lèi)標(biāo)本在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的有意義的結(jié)果。

（4）需要定量培養(yǎng)的標(biāo)本（如尿液、肺泡灌洗液）應(yīng)按要求接種，并進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

3.細(xì)菌鑒定：

（1）能根據(jù)細(xì)菌菌落形態(tài)和涂片染色結(jié)果選擇適當(dāng)?shù)蔫b定試驗(yàn)項(xiàng)目，并采用適宜的方法將細(xì)菌鑒定到種。

（2）對(duì)細(xì)菌鑒定所需要使用的血漿凝固酶、觸酶、氧化酶試驗(yàn)及診斷性抗血清等至少應(yīng)在每個(gè)實(shí)驗(yàn)當(dāng)日做陽(yáng)性和陰性質(zhì)控。

（3）對(duì)細(xì)菌鑒定所需的其他生化反應(yīng)試劑至少應(yīng)在每一批次產(chǎn)品使用前做陰性和陽(yáng)性質(zhì)控，并在有效期內(nèi)使用。

4.藥敏試驗(yàn)：

（1）能根據(jù)本單位條件及所檢測(cè)的病原菌種類(lèi)選擇紙片擴(kuò)散法、稀釋法、濃度梯度擴(kuò)散法（Ｅ試驗(yàn)）或自動(dòng)化儀器法進(jìn)行抗菌藥物敏感性試驗(yàn)。

（2）試驗(yàn)過(guò)程應(yīng)遵循標(biāo)準(zhǔn)化操作方法或制造商建議進(jìn)行操作

（3）藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果解釋至少應(yīng)遵循上一年度ＣＬＳＩ藥敏試驗(yàn)的判斷標(biāo)準(zhǔn)。

（4）使用自動(dòng)化儀器進(jìn)行藥敏試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按制造商的要求進(jìn)行質(zhì)控。

（5）應(yīng)定期（至少每１～２年１次）使用最新的ＣＬＳＩ文件標(biāo)準(zhǔn)對(duì)儀器的藥敏試驗(yàn)判斷折點(diǎn)進(jìn)行評(píng)估，僅報(bào)告符合文件標(biāo)準(zhǔn)的抗菌藥物藥敏試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)評(píng)估不符合要求（如藥物稀釋度不包括藥敏判斷折點(diǎn)、折點(diǎn)設(shè)置錯(cuò)誤、檢測(cè)結(jié)果偏離）的儀器應(yīng)暫停使用，并與儀器供應(yīng)商溝通。

（6）使用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按要求對(duì)每一批號(hào)的藥敏試驗(yàn)紙片進(jìn)行質(zhì)控，如果質(zhì)控在控，則改為每周質(zhì)控１次（若檢測(cè)頻率小于每周１次，則應(yīng)在每個(gè)檢測(cè)日進(jìn)行質(zhì)控）。

能夠?qū)Ω黝?lèi)標(biāo)本染色鏡檢和細(xì)菌培養(yǎng)鑒定結(jié)果進(jìn)行及時(shí)準(zhǔn)確的報(bào)告，并能進(jìn)行結(jié)果解釋，以及與臨床進(jìn)行良好的溝通。有檢驗(yàn)醫(yī)師的微生物室，可發(fā)出“臨床微生物檢驗(yàn)診斷報(bào)告”。

對(duì)各類(lèi)標(biāo)本培養(yǎng)陰性結(jié)果應(yīng)進(jìn)行規(guī)范報(bào)告：如血液增菌培養(yǎng)報(bào)告“培養(yǎng)５ｄ無(wú)菌生長(zhǎng)”；膿液、引流液、腦脊液、穿刺液等培養(yǎng)報(bào)告“培養(yǎng)××小時(shí)無(wú)菌生長(zhǎng)”；咽拭子、痰液等報(bào)告“正常菌群生長(zhǎng)”或“未分離出致病菌”；糞便或肛拭子等報(bào)告“未培養(yǎng)出志賀菌、沙門(mén)菌”或“未培養(yǎng)出霍亂弧菌”等。

血液、腦脊液、骨髓等無(wú)菌體液標(biāo)本檢出細(xì)菌（鏡檢或培養(yǎng)）應(yīng)分級(jí)報(bào)告，并按危急值報(bào)告和登記。

當(dāng)鑒定出高致病性病原微生物（如布魯菌、弗朗西斯菌）時(shí)，應(yīng)按相關(guān)法規(guī)要求進(jìn)行上報(bào)和處理。

短時(shí)間（５～７ｄ）內(nèi)在同一科室分離出３株或以上同種病原菌，或某種耐藥菌分離率異常增高時(shí)應(yīng)報(bào)告醫(yī)院感染管理部門(mén)。

對(duì)藥敏試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)按規(guī)定進(jìn)行審核和報(bào)告，應(yīng)特別關(guān)注天然耐藥、罕見(jiàn)耐藥菌株和特殊部位分離的病原菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果的審核和報(bào)告。

對(duì)醫(yī)院感染管理規(guī)定監(jiān)測(cè)的多重耐藥菌要進(jìn)行報(bào)告和預(yù)警。

應(yīng)定期（至少每年１～２次）對(duì)抗菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并向醫(yī)院感染部門(mén)和臨床醫(yī)師通報(bào)。

?應(yīng)參加全國(guó)或地區(qū)性的耐藥監(jiān)測(cè)。

對(duì)冰箱、培養(yǎng)箱和水浴箱至少每日觀察并記錄１次溫度；ＣＯ２培養(yǎng)箱應(yīng)每日記錄ＣＯ２濃度；紫外燈應(yīng)每日記錄消毒時(shí)間，應(yīng)定期（每６個(gè)月）監(jiān)測(cè)紫外線強(qiáng)度并監(jiān)測(cè)紫外燈消毒的效果。

壓力滅菌器應(yīng)每次使用化學(xué)指示劑，每周使用生物指示劑監(jiān)測(cè)滅菌效果。

細(xì)菌濁度儀至少每６個(gè)月應(yīng)進(jìn)行檢定或校準(zhǔn)１次。

?生物安全柜的高效過(guò)濾器、氣流和負(fù)壓等參數(shù)，壓力滅菌器的壓力表以及卡尺、溫度計(jì)、濕度計(jì)、移液器的準(zhǔn)確性應(yīng)定期驗(yàn)證、檢定或校準(zhǔn)［４］。

按要求參加相應(yīng)的能力驗(yàn)證／室間質(zhì)評(píng)。應(yīng)對(duì)“不滿意”和“不合格”的能力驗(yàn)證／室間質(zhì)評(píng)結(jié)果進(jìn)行分析并采取糾正和預(yù)防措施。

?對(duì)沒(méi)有開(kāi)展能力驗(yàn)證／室間質(zhì)評(píng)的項(xiàng)目，應(yīng)至少每６個(gè)月與其他實(shí)驗(yàn)室（或其他試驗(yàn)方法）進(jìn)行１次性能比對(duì)評(píng)估試驗(yàn)。

臨床微生物室屬于二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)按照相關(guān)法規(guī)要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)和管理。

臨床微生物室應(yīng)定期（至少每年一次）進(jìn)行生物安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。

應(yīng)根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果配備必要的生物安全防護(hù)設(shè)備，如生物安全柜、高壓消毒滅菌器、紫外燈、應(yīng)急燈、洗眼和噴淋設(shè)施。根據(jù)所配備的生物防護(hù)設(shè)備設(shè)施和個(gè)體防護(hù)能力明確規(guī)定本實(shí)驗(yàn)室所能開(kāi)展的檢驗(yàn)項(xiàng)目。

應(yīng)根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估結(jié)果對(duì)檢驗(yàn)人員進(jìn)行生物安全防護(hù)教育，并配備個(gè)人防護(hù)裝備和用品（如手套、口罩、帽子、實(shí)驗(yàn)用鞋、防護(hù)服、防護(hù)眼罩等）。

二級(jí)醫(yī)院不建議保存菌種（質(zhì)控菌株和需要進(jìn)一步確認(rèn)的臨床菌株除外），三級(jí)醫(yī)院可以保存非高致病性病原微生物菌種，但應(yīng)指定專人負(fù)責(zé)，應(yīng)有

存儲(chǔ)、使用、轉(zhuǎn)運(yùn)、銷(xiāo)毀記錄，謹(jǐn)防濫用、誤用。實(shí)驗(yàn)中如遇到疑似高致病性菌（按照《人間傳染的病原微生物名錄》），應(yīng)立即向上級(jí)匯報(bào)，不要再進(jìn)行后續(xù)的試驗(yàn)和標(biāo)本處理。

對(duì)超過(guò)規(guī)定保存時(shí)間的標(biāo)本和培養(yǎng)物應(yīng)高壓滅菌后再交保潔人員進(jìn)行處理，并進(jìn)行交接記錄。針對(duì)在試驗(yàn)過(guò)程中可能產(chǎn)生的生物安全意外事故（如針刺傷、皮膚、黏膜或環(huán)境污染）應(yīng)有相應(yīng)的應(yīng)急預(yù)案和事故記錄。