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顯微鏡研究方法之相差鏡檢法

   2025-03-17 顯微鏡772
好多人對于顯微鏡中的相差鏡檢法還不是很了解,本文旨在幫助顯微鏡使用人員,更好的使用顯微鏡,了解相差鏡檢法的相關(guān)原理、方法,從而能夠更好的進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。
 
在光學(xué)顯微鏡的發(fā)展過程中,相差鏡檢術(shù)的發(fā)明成功,是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就。我們知道,人眼只能區(qū)分光波的波長(顏色)和振幅(亮度),對于無色通明的生物標(biāo)本,當(dāng)光線通過時(shí),波長和振幅變化不大,在明場觀察時(shí)很難觀察到標(biāo)本。
 
相差顯微鏡利用被檢物體的光程之差進(jìn)行鏡檢,也就是有效地利用光的干涉現(xiàn)象,將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹?,即使是無色透明的物質(zhì)也可成為清晰可見。這大大便利了活體細(xì)胞的觀察,因此相差鏡檢法廣泛應(yīng)用于倒置顯微鏡。
 
相差顯微鏡的基本原理是,把透過標(biāo)本的可見光的光程差變成振幅差,從而提高了各種結(jié)構(gòu)間的對比度,使各種結(jié)構(gòu)變得清晰可見。光線透過標(biāo)本后發(fā)生折射,偏離了原來的光路,同時(shí)被延遲了1/4λ(波長),如果再增加或減少1/4λ,則光程差變?yōu)?/2λ,兩束光合軸后干涉加強(qiáng),振幅增大或減下,提高反差。
 
在構(gòu)造上,相差顯微鏡有不同于普通光學(xué)顯微鏡兩個(gè)特殊之處:
1. 環(huán)形光闌(annular  diaphragm) 位于光源與聚光器之間,作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐,焦聚到標(biāo)本上。
 
2. 相位板(annular phaseplate)在物鏡中加了涂有氟化鎂的相位板,可將直射光或衍射光的相位推遲1/4λ。分為兩種:
1. A+相板:將直射光推遲1/4λ,兩組光波合軸后光波相加,振幅加大,標(biāo)本結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變亮,形成亮反差(或稱負(fù)反差)。
2. B+相板:將衍射光推遲1/4λ,兩組光線合軸后光波相減,振幅變小,形成暗反差(或稱正反差),結(jié)構(gòu)比周圍介質(zhì)更加變暗。
 
標(biāo)簽: 顯微鏡
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