Meso Scale Discovery ( MSD ) 將ELISA線性范圍提高2-3個數(shù)量級，靈敏度提高10-100倍
Percepta在針對550位北美和歐洲的頂級生物醫(yī)藥研究人員的報告中顯示，基于電化學發(fā)光技術的MSD ( Meso Scale Discovery ) 是最受歡迎的5大免疫分析品牌之一。MSD電化學發(fā)光技術 與傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫分析ELISA優(yōu)勢對比如下:
1.更高靈敏度與更寬的線性范圍
傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫分析ELISA主要基于酶標儀，酶標儀的靈敏度往往在10-1pg/ml。 MSD電化學發(fā)光技術主要基于超敏多因子電化學發(fā)光分析儀MESO Sector 600或Quickplex SQ 120。MSD靈敏度可達0.05pg/ml，有效線性范圍達6 log。
傳統(tǒng)ELISA常規(guī)線性范圍在10pg/ml-1000pg/ml，采用Ultra-sensitivity試劑盒則為0.5-10pg/ml。 對于一個生物學實驗，往往要兼顧正常對照組與疾病組的樣本，樣本中的待測蛋白濃度分布一般從零點幾個pg到幾千pg不等，所以一個ELISA試劑盒的線性范圍不能同時兼顧高低豐度蛋白的檢測，需要非常多的預實驗進行稀釋度摸索，費時費力。 而MSD提供了從亞皮克級到幾萬皮克濃度的寬線性范圍，有效將所有樣本落在最佳線性范圍內，得到準確測定（見下圖比對，紅色條狀為疾病樣本，黃色條狀為正常參照組）。 同時MSD的靈敏度可達0.05pg/ml，對于目前有些疾病樣本中待測蛋白濃度下調的研究項目來說，更能夠有效的發(fā)現(xiàn)疾病組與正常對照組的差異，實現(xiàn)新的科學發(fā)現(xiàn)。
2.節(jié)省樣本用量，可實現(xiàn)多重檢測
傳統(tǒng)ELISA所需樣本量一般為50-100ul，如果同時關注10個細胞因子的表達調控則可能需要多達500-1000ul的樣本，對于很多ELISA實驗來說樣本量就成了關鍵問題。
MSD通過點陣技術，在96孔石墨電極板里可實現(xiàn)10個指標每孔的檢測。也可在24孔板里定制實現(xiàn)100指標/孔的篩選檢測。滿足了不同的實驗需求。在樣本用量上，無論單指標或多指標都只需≤25ul的樣本，即可完成檢測。為珍稀樣本的研究提供了更多的數(shù)據(jù)。
目前MSD可以在100ul的極其珍貴的腦脊液樣本中，復孔定量測定40種Biomarker，這是以往技術都所不能實現(xiàn)的。
3. 均一性、重復性高
MSD 板內CV<6-8%,板間<10%,批間<15%。同時MSD試劑盒有效期長達30個月，為長時間研究項目，提供了使用同一批號試劑的可能性。
4. 樣本兼容度高，基質效應小
MSD平臺由于其獨特的電化學發(fā)光原理，可將許多非特異信號予以排除，所以受樣本性質的影響就更小（如粘稠樣本，懸濁顆粒樣本等），因此對于各類生物學樣本的兼容度更高。
目前MSD平臺上測定樣本總類主要包括：血清，血漿，培養(yǎng)上清，細胞/組織裂解液，腦脊液，尿液，關節(jié)滑液，唾液，痰液，糞便提取液，眼睛房水，各類灌洗液等基本所有的生物學樣本。對于最簡單的血漿樣本來說，MSD也可兼容不同抗凝劑的血漿樣本。大大降低了實驗所需樣本收集上的難度。
此外基質效應會影響到實驗準確性與靈敏度，MSD是目前唯一一個被國外科學家廣泛認可的基本無基質效應的免疫分析平臺。
請參見: Immunol Res;DOI 10.1007/s12026-014-8491-6; T.Maecker
5. 實驗流程簡便、快速、多元化
MSD提供了比ELISA更為便捷快速的實驗流程，將加樣等手動操作時間縮短至45分鐘以內，并為培養(yǎng)上清等高豐度樣本快速檢測，提供了只需2.5小時的一步法流程，解放了勞動力，提高了科研效率。同時在MSD平臺上由于特有的電化學發(fā)光技術，可有效控制背景信號，可以實現(xiàn)免洗的實驗流程。請見下圖MSD流程以及實驗時間比較：
一步法流程：
超敏實驗流程：
實驗流程時間比對：
6. 信號穩(wěn)定且不受顯色順序影響
ELISA在顯色時，需要避光來保證信號穩(wěn)定。同時，由于底物與終止液加入有先后時間差異，會不可避免的產(chǎn)生因顯色時間不一致導致的數(shù)據(jù)差異。
MSD由于基于電化學發(fā)光技術，信號分子SULFO-TAG需在電激發(fā)的情況下才能產(chǎn)生信號，因此整個實驗流程無需避光，不受實驗操作人員技術水平差異的影響。此外，在實驗完成加入所有液體后，并不會被激發(fā)出任何信號。只有送入儀器，通過電極電激發(fā)后方才產(chǎn)生信號，每孔激發(fā)與信號采集時長統(tǒng)一，避免了像ELISA底物與終止液加入順序先后所導致的數(shù)據(jù)差異，數(shù)據(jù)穩(wěn)定度極高。 請見下圖電化學發(fā)光平臺示意圖：
7.開放性平臺，高載量的石墨電極，多樣化實驗方案，更節(jié)省的包被用量。
MSD平臺所用的石墨電極板，為高分子聚合材料，表面與內部具有3D結構，能夠提高有效載量至傳統(tǒng)的ELISA板的10-100倍。因此在板底可以固定蛋白、小肽、多糖、核酸、病毒顆粒、細胞膜、活細胞等，實現(xiàn)不同的實驗檢測方案。
板底3D結構示意圖
多元化實驗方案
同時，由于載量不同以及表面親疏水修飾的不同，MSD板在包被方案上可以使用傳統(tǒng)方法的Solution Coat，也可以采用Dot Coat的方法，將2-5ul蛋白點在板底中央進行包被。蛋白用量只需要Solution Coat的1/10-1/5，且包被時間僅僅需要一個小時，省時省力。
8．技術成熟可靠。歐美研究人員在10年前已經(jīng)開始使用“Meso Scale Discovery” 替代/升級ELISA了。
9. 部分檢測指標如下：
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多因子檢測組合 |
檢測指標 |
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Human Biomarker 40-Plex Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
bFGF, CRP, Eotaxin, Eotaxin-3, Flt-1, GM-CSF, ICAM-1, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, IL-10, IL-12 p70, IL-12/IL-23p40, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1α, MIP-1β, PlGF, SAA, TARC, Tie-2, TNF-α, TNF-β, VCAM-1, VEGF, VEGF-C, VEGF-D |
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Neuroinflammation Panel 1 (hu) Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
bFGF, CRP, Eotaxin, Eotaxin-3, Flt-1, ICAM-1, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, IL-10, IL-12/IL-23p40, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1α, MIP-1β, PlGF, SAA, TARC, Tie-2, TNF-α, TNF-β, VCAM-1, VEGF, VEGF-C, VEGF-D |
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Human Cytokine 30-Plex Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
Eotaxin, Eotaxin-3, GM-CSF, IFN-γ, IL-1α, IL-1β, IL-10, IL-12 p70, IL-12/IL-23p40, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1α, MIP-1β, TARC, TNF-α, TNF-β, VEGF |
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NHP Cytokine 24-Plex Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
Eotaxin-3, GM-CSF, IFN-γ, IL-1β, IL-10, IL-12/IL-23p40, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-2, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1α, MIP-1β, TARC, TNF-β, VEGF |
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Proinflammatory Panel 1 (rat) Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
IFN-γ, IL-1β, IL-10, IL-13, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, KC/GRO, TNF-α |
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Chemokine Panel 1 (human) Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
Eotaxin, Eotaxin-3, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1α, MIP-1β, TARC |
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Proinflammatory Panel1 (mouse) Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
IFN-γ, IL-1β, IL-10, IL-12 p70, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, KC/GRO, TNF-α |
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Proinflammatory Panel1 (human) Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
IFN-γ, IL-1β, IL-10, IL-12 p70, IL-13, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, TNF-α |
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Cytokine Panel 1 (human) Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
GM-CSF, IL-1α, IL-12/IL-23p40, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-5, IL-7, TNF-β, VEGF |
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Human Proinflammatory Panel I (4-Plex) (1 Plate) V-PLEX™ |
IFN-γ, IL-1β, IL-6, TNF-α |
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Human Proinflammatory Panel II (4-Plex) (1 Plate) V-PLEX™ |
IL-1β, IL-6, IL-8, TNF-α |
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Chemokine Panel 1 (NHP) Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
Eotaxin-3, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1α, MIP-1β, TARC |
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Chemokine Panel 1 (NHP) Kit (1 Plate) V-PLEX™ Plus |
Eotaxin-3, IL-8 (HA), IP-10, MCP-1, MCP-4, MDC, MIP-1α, MIP-1β, TARC |
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Proinflammatory Panel 1 (NHP) Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
IFN-γ, IL-1β, IL-10, IL-2, IL-6, IL-8 |
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Cytokine Panel 1 (NHP) Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
GM-CSF, IL-12/IL-23p40, IL-15, IL-16, IL-17A, IL-5, IL-7, TNF-β, VEGF |
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Angiogenesis Panel 1 (human) Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
bFGF, Flt-1, PlGF, Tie-2, VEGF, VEGF-C, VEGF-D |
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Vascular Injury Panel 2(human) Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
CRP, ICAM-1, SAA, VCAM-1 |
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Ab Peptide Panel 1 (4G8) Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
Abeta 38, Abeta 40, Abeta 42 |
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Ab Peptide Panel 1 (6E10) Kit (1 Plate) V-PLEX™ |
Abeta 38, Abeta 40, Abeta 42 |
