HPLC 故障及排除方法介紹

2025-04-05 上海普迪生物技術有限公司794

診狀	可能的原因	解決方法
（一）保留時間變化	1. 柱溫變化	柱恒溫
	2. 等度與梯度間未能充分平衡	至少用 10 倍柱體積的流動相平衡柱
	3. 緩沖液容量不夠	用 >25mmol/L 的緩沖液
	4. 柱污染	每天沖洗柱
	5. 柱內(nèi)條件變化	穩(wěn)定進樣條件 , 調節(jié)流動相
	6. 柱快達到壽命	采用保護柱
（二）保留時間縮短	1. 流速增加	檢查泵 , 重新設定流速
	2. 樣品超載	降低樣品量
	3. 鍵合相流失	流動相 PH 值保持在 3~7.5 檢查柱的方向
	4. 流動相組成變化	防止流動相蒸發(fā)或沉淀
	5. 溫度增加	柱恒溫
（三）保留時間延長	1. 流速下降	管路泄漏 , 更換泵密封圈 , 排除泵內(nèi)氣泡
	2. 硅膠柱上活性點變化	用流動相改性劑 , 如加三乙胺 , 或采用堿至鈍化柱
	3. 鍵合相流失	同前（二）3
	4. 流動相組成變化	同前（二）4
	5. 溫度降低	同前（二）5
（四）出現(xiàn)肩峰或分叉	1. 樣品體積過大	用流動相配樣 , 總的樣品體積小于第一峰的 15%
	2. 樣品溶劑過強	采用較弱的樣品溶劑
	3. 柱塌陷或形成短路通道	更換色譜柱 , 采用較弱腐蝕性條件
	4. 柱內(nèi)燒結不銹鋼失效	更換燒結不銹鋼 , 加在線過濾器 , 過濾樣品
	5. 進樣器損壞	更換進樣器轉子
（五）鬼峰	1. 進樣閥殘余峰	每次用后用強溶劑清洗閥 , 改進閥和樣品的清洗
	2. 樣品中未知物	處理樣品
	3. 柱未平衡	重新平衡柱 , 用流動相作樣品溶劑（尤其是離子對色譜）
	4. 三氟乙酸（TFA）氧化（肽譜）	每天新配 , 用抗氧化劑
	5. 水污染（反相）	通過變化平衡時間檢查水質量,用 HPLC 級的水
（六）基線噪聲	1. 氣泡（尖銳峰）	流動相脫氣 , 加柱后背壓
	2. 污染（隨機噪聲）	清洗柱 , 凈化樣品 , 用 HPLC 級試劑
	3. 檢測器燈連續(xù)噪聲	更換氘燈
	4. 電干擾（偶然噪聲）	采用穩(wěn)壓電源 , 檢查干擾的來源（如水浴等）
	5. 檢測器中有氣泡	流動相脫氣 , 加柱后背壓
（七）峰拖尾	1. 柱超載	降低樣品量 , 增加柱直徑采用較高容量的固定相
	2. 峰干擾	清潔樣品 , 調整流動相
	3. 硅羥基作用	加三乙胺 , 用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相 PH 值 , 鈍化樣品
	4. 同前（四）4	同前（四）4
	5. 同前（四）3	5. 同前（四）3
	6. 死體積或柱外體積過大	連接點降至最低 , 對所有連接點作合適調整 , 盡可能采用細內(nèi)徑的連接管
	7. 柱效下降	用較低腐蝕條件 , 更換柱 , 采用保護柱
（八）峰展寬	1. 進樣體積過大	同（四）1
	2. 在進樣閥中造成峰擴展	進樣前后排出氣泡以降低擴散
	3. 數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢	設定速率應是每峰大于 10 點
	4. 檢測器時間常數(shù)過大	設定時間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的 10%
	5. 流動相粘度過高	增加柱溫 , 采用低粘度流動相
	6. 檢測池體積過大	用小體積池 , 卸下熱交換器
	7. 保留時間過長	等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫
	8. 柱外體積過大	將連接管徑和連接管長度降至最小
	9. 樣品過載	進小濃度小體積樣品

標簽： HPLC ,故障,排除

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