亚洲色婷婷六月亚洲婷婷6月-国产av午夜精品一区二区三区-日韩国产丝袜人妻一二区-97人妻人人揉人人躁人人-国产精品视频一区二区噜噜-国内精品伊人久久久久av影院

現(xiàn)代資訊現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室裝備網(wǎng)
全國(guó)服務(wù)熱線
400-100-9187、0731-84444840

采用超高效合相色譜(UPC2)串聯(lián)ESI-MS/MS分析膽汁酸

   2025-03-16 沃特世科技(上海)有限公司1143

Kaori Taguchi、 Eiichiro Flukusaki 和 Takeshi Bamba
1 沃特世公司(美國(guó)馬薩諸塞州米爾福德市)
2 日本吹田市,大阪大學(xué),生物技術(shù)系

目的

利用UltraPerformance Convergence Chromatography™ (UPC2™)超高效合相色譜建立一種可快速進(jìn)行膽汁酸分析和定量的新方法。

背景

膽汁酸作為一種信號(hào)分子,在調(diào)節(jié)甘油三酯、膽固醇和葡萄糖代謝中扮演著重要的角色。 這些信號(hào)通路已經(jīng)成為開(kāi)發(fā)治療代謝性疾病藥物的靶點(diǎn)。此外,膽汁酸還可用作血清中揭示肝臟疾病和膽汁酸調(diào)控代謝機(jī)制的生物標(biāo)志物。因此,建立一種可測(cè)定體內(nèi)膽汁酸的分析方法具有重要意義。

由于結(jié)構(gòu)類似物(如同分異構(gòu)體)的存在,以及非結(jié)合型和結(jié)合型膽汁酸之間的極性差異使得膽汁酸的分離尤為復(fù)雜。過(guò)去,研究人員采用氣相色譜(GC)和液相色譜(LC)分析這些化合物,但這些方法都存在一定的局限性。GC法通常需要進(jìn)行步驟繁瑣的衍生化處理,且衍生化的每個(gè)步驟中都會(huì)損失一定量的膽汁酸。此外,采用GC分析法測(cè)定結(jié)合型膽汁酸的成分或濃度時(shí),需對(duì)若干等分的樣品分別進(jìn)行提取。

采用超高效合相色譜串聯(lián)ESI-MS/MS系統(tǒng),可在13 min內(nèi)同時(shí)分析25種膽汁酸。

圖1. 13 min內(nèi)同時(shí)分析25種膽汁酸標(biāo)準(zhǔn)品混合物,包括甘氨酸和?;撬峤Y(jié)合物。各MRM色譜圖中的化合物名稱按保留時(shí)間順序標(biāo)示。

圖1. 13 min內(nèi)同時(shí)分析25種膽汁酸標(biāo)準(zhǔn)品混合物,包括甘氨酸和?;撬峤Y(jié)合物。各MRM色譜圖中的化合物名稱按保留時(shí)間順序標(biāo)示。

圖2. 采用UPC2/MS系統(tǒng)對(duì)大鼠血清中的膽汁酸進(jìn)行定量測(cè)定(n=6)。

圖2. 采用UPC2/MS系統(tǒng)對(duì)大鼠血清中的膽汁酸進(jìn)行定量測(cè)定(n=6)。

雖然LC分析法可同時(shí)檢測(cè)結(jié)合型和非結(jié)合型膽汁酸,但單針?lè)治鰰r(shí)間長(zhǎng)達(dá)30min。在本應(yīng)用紀(jì)要中,我們將介紹一種可快速進(jìn)行膽汁酸分析和定量的UPC2/MS方法。

解決方案

本實(shí)驗(yàn)利用Waters® ACQUITY UPC2™系統(tǒng),以超臨界二氧化碳(SCCO2)為主要流動(dòng)相建立了一種可同時(shí)分離25種不同膽汁酸(包括其結(jié)合物在內(nèi))的方法。以SCCO2為流動(dòng)相可加速分析物的擴(kuò)散并降低反壓,從而縮短分析時(shí)間。為了提高分析的靈敏度和特異性,我們將ACQUITY UPC2系統(tǒng)與Xevo® TQ-S質(zhì)譜儀聯(lián)用。25種不同的膽汁酸(包括甘氨酸和?;撬峤Y(jié)合物)的分離結(jié)果見(jiàn)圖1。

所有的膽汁酸在13 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)分離,與此前的分析方法相比,分析時(shí)間縮短了約2倍。采用不同的固定相、柱溫設(shè)置、添加劑以及不同pH值的改性劑的組合對(duì)方法進(jìn)行優(yōu)化。Xevo TQ-S的檢測(cè)模式設(shè)置為ESI負(fù)離子模式,無(wú)需使用尾吹氣即可獲得最大靈敏度。


使用這一方法對(duì)實(shí)際生物樣品(大鼠血清)中的膽汁酸及其結(jié)合物進(jìn)行定量分析。使用甲醇按甲醇:血清3:1(v/v)的比例對(duì)購(gòu)得的大鼠血清進(jìn)行去蛋白處理,再進(jìn)行渦旋和離心。取上清液注入U(xiǎn)PC2/MS/MS,測(cè)定血清樣品中各膽汁酸及其結(jié)合物的濃度。結(jié)果如圖2所示,表明本方法可測(cè)定生物基質(zhì)中各膽汁酸及其結(jié)合物的水平,且重現(xiàn)性良好。

總結(jié)

采用超高效合相色譜(UPC2)串聯(lián)ESI-MS/MS系統(tǒng),可同時(shí)分析生物基質(zhì)中的25種膽汁酸與其結(jié)合物。采用亞2μm填料的色譜柱,在13 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)所有分析物的分離,分離度滿足要求。本應(yīng)用紀(jì)要證明:這一新的分離方法非常適合評(píng)價(jià)膽汁酸對(duì)甘油三酸酯、膽固醇和葡萄糖代謝的影響,并可促進(jìn)治療代謝性疾病的新型藥物靶點(diǎn)的開(kāi)發(fā)。

 

 
標(biāo)簽: 超高效合相色譜
反對(duì) 0舉報(bào) 0 收藏 0 打賞 0
 
更多>同類資訊
推薦圖文
推薦資訊
點(diǎn)擊排行
?