產(chǎn)品名稱：TonkBio RT Reagent Kit（for qPCR）

英文名稱：TonkBio RT Reagent Kit（for qPCR）

產(chǎn)品描述：TonkBio RT Reagent Kit是專門(mén)用于兩步法RT-PCR的第一步，含有反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的全部試劑。具有較強(qiáng)的延伸能力的Tonescript M-MLV能夠在短時(shí)間內(nèi)高效的合成用于qPCR的cDNA。操作簡(jiǎn)單，適合進(jìn)行高通量分析?？梢耘浜蟂YBR Green法和Taqman探針?lè)ㄗ鱿乱徊交虮磉_(dá)分析。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、可以快速、高效合成qPCR用的cDNA，是兩步法反轉(zhuǎn)錄的優(yōu)選試劑。

2、提供了兩種反轉(zhuǎn)錄引物，OligodT primer和Random primer，可根據(jù)具體反應(yīng)情況使用。反轉(zhuǎn)錄時(shí)可以使用OligodT primer或Randomprimer，也可以兩種引物同時(shí)使用。

3、反應(yīng)僅需15分鐘。

4、與qPCR試劑兼容性高。

應(yīng)用舉例：

常見(jiàn)問(wèn)題解析：

1、 沒(méi)有RT-PCR產(chǎn)物或產(chǎn)量低

◆RNA模板降解。RNA的純度和完整對(duì)于反轉(zhuǎn)錄得到全長(zhǎng)cDNA是非常重要的。提取

的RNA應(yīng)進(jìn)行電泳檢測(cè)以確定其是否降解。同時(shí)RNA要避免反復(fù)凍融。

◆RNA模板純度低。提取RNA的過(guò)程中，可能殘留一些鹽離子、試劑，如EDTA、酚、

胍鹽、磷酸鹽、多胺等抑制接下來(lái)的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。建議用75%乙醇（DEPC水配制）仔細(xì)清洗RNA沉淀。

◆引物不合適。選擇合適的引物，當(dāng) RNA是細(xì)菌RNA或者是沒(méi)有polyA尾的RNA要選擇隨機(jī)引物或者特異引物。

◆目的基因含有復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)或高GC含量。建議選擇隨機(jī)引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，將反轉(zhuǎn)錄溫度提高至55℃。

2、RNA 中混有基因組 DNA

◆為避免基因組DNA直接擴(kuò)增造成結(jié)果不準(zhǔn)確，①可以在反轉(zhuǎn)錄之前對(duì)RNA進(jìn)行Dnase I 的消化，②引物設(shè)計(jì)時(shí)避免基因組擴(kuò)增，跨較長(zhǎng)內(nèi)含子設(shè)計(jì)上下游引物。

3、陰性對(duì)照中有RT-PCR產(chǎn)物

◆陰性對(duì)照中有RT-PCR產(chǎn)物也表明有DNA的污染。在反轉(zhuǎn)錄之前可以對(duì) RNA 進(jìn)行 DNaseI的消化。