現(xiàn)在，我們一起來揭開廣東省第二人民醫(yī)院P3實(shí)驗(yàn)室的神秘面紗，看看病毒究竟在P3實(shí)驗(yàn)室是怎樣被“揪出來”的？

揭秘一：前世今生

P3實(shí)驗(yàn)室是生物安全防護(hù)三級實(shí)驗(yàn)室，P是Protection的縮寫。整個(gè)實(shí)驗(yàn)室完全密封，室內(nèi)處于負(fù)壓狀態(tài)，從而使實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的氣體不會(huì)泄漏到外面而造成污染，也就是“氣流”的單向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室是指實(shí)驗(yàn)室的結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備能夠確保工作人員在處理含有致病微生物及其毒素時(shí)，不受實(shí)驗(yàn)對象侵染，周圍環(huán)境不受污染。

根據(jù)微生物及其毒素的危害程度不同，分為四級，一級最低，四級最高。廣東省第二人民醫(yī)院新冠病毒核酸檢測就是在P3實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的。

揭秘二：抽絲剝繭

核酸檢測是確診新冠肺炎的“金標(biāo)準(zhǔn)”，而檢測流程中的每一個(gè)環(huán)節(jié)都是精細(xì)活，容不得半點(diǎn)馬虎。在操作中，實(shí)驗(yàn)員面對眼前的樣本，需要“一個(gè)一個(gè)地揭開蓋子，開蓋加樣和核酸提取”，這無疑是與“病毒”正面交鋒，現(xiàn)在來看省二醫(yī)的實(shí)驗(yàn)員是如何一一過招。

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的檢測流程可分為5個(gè)步驟：樣本進(jìn)入“傳遞窗”——滅活處理——開蓋加樣和核心提取——擴(kuò)增反應(yīng)判斷結(jié)果——高壓滅菌。

第一步，樣本進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室也有講究——“傳遞窗”隔離空氣。

采集的檢測樣本如咽拭子或肛拭子，在進(jìn)入P3實(shí)驗(yàn)室前就得先進(jìn)入一個(gè)特殊的窗口——“傳遞窗”，這個(gè)窗口也叫Air Lock，空氣鎖。顧名思義，與空氣有關(guān)，這個(gè)傳遞窗有不能同時(shí)打開的雙重門，保證傳遞樣本時(shí)帶進(jìn)去的空氣被隔離在雙重門中，保證實(shí)驗(yàn)室外的環(huán)境不受污染。這也是“三流”中“物流”，樣本的命運(yùn)起點(diǎn)，在這里開啟它在實(shí)驗(yàn)室中短暫的一生。

第二步，檢測前的滅活處理——不一定但相對的安全。

標(biāo)本處理間，在這里進(jìn)行開蓋加樣和核酸提取。

樣本在水浴箱經(jīng)半個(gè)小時(shí)56℃高溫滅活，這樣會(huì)使病毒蛋白不再有生理活性，失去感染、致病和繁殖能力，在對樣本進(jìn)行檢測時(shí)相對安全，但是病毒蛋白的基因序列并沒有受到影響。

第三步，檢測的核心環(huán)節(jié)——進(jìn)行開蓋加樣和核酸提取。

通過核酸擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。

第四步，擴(kuò)增反應(yīng)——45個(gè)循環(huán)繪制熒光曲線判斷結(jié)果。

提取的核酸送到核酸檢測室內(nèi)，就要上儀器了。提取的核酸加入擴(kuò)增試劑中，通過熒光PCR儀進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，先將提取的核酸逆轉(zhuǎn)錄成DNA，再以DNA為模版，對特定位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增，利用不同的溫度進(jìn)行變性、退火和延伸，每個(gè)循環(huán)采集熒光值，45個(gè)循環(huán)后繪制熒光曲線，用時(shí)約110分鐘，實(shí)驗(yàn)員根據(jù)熒光曲線分析判斷結(jié)果的陰性和陽性。

第五步，污染物的高壓滅菌處理。

實(shí)驗(yàn)過程產(chǎn)生的污物通過高壓滅菌后，按相關(guān)普通醫(yī)療垃圾處理。“物流”的終點(diǎn)在這里就結(jié)束了。

產(chǎn)生的污物通過高壓滅菌后，按相關(guān)醫(yī)療垃圾處理

揭秘三：傾柯衛(wèi)足

“三流”中的“人流”又是什么？來看看工作人員是如何工作的。

首先在清潔區(qū)內(nèi)穿戴中級防護(hù)服——通過緩沖間進(jìn)入到實(shí)驗(yàn)室內(nèi)負(fù)壓工作間，在這里進(jìn)行標(biāo)本處理，核酸提取及檢測——完畢后進(jìn)行空間、表面消毒，按順序脫下防護(hù)服——通過淋浴間更衣后，回到清潔區(qū)。這些步驟一個(gè)都不能少！

核酸檢測的主要宗旨是高效、有序和安全。其中安全是重中之重，尤其是工作人員的安全。到目前為止，P3實(shí)驗(yàn)室未出現(xiàn)過生物安全問題，當(dāng)然也與平時(shí)訓(xùn)練有關(guān)。

揭秘四：棄偽存真

任何一個(gè)環(huán)節(jié)都不能忽視，任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題都可能導(dǎo)致“假陰性”或“假陽性”。因此，為保障檢測的質(zhì)量，檢測結(jié)果將經(jīng)歷重重的比對與復(fù)核。

據(jù)介紹，檢測質(zhì)量的保障措施在檢測前就已經(jīng)開始了，樣本采集的醫(yī)務(wù)人員必須經(jīng)過嚴(yán)格的培訓(xùn)和考核才能上崗，樣本的質(zhì)量與采集的技術(shù)密切相關(guān)，每一幀動(dòng)作流程都必須按規(guī)定進(jìn)行，樣本采集完后的護(hù)送工作都需按照嚴(yán)密的程序，由專人專道配送到實(shí)驗(yàn)室。

在檢測過程中，實(shí)驗(yàn)員保持始終如一的謹(jǐn)慎態(tài)度進(jìn)行每一次測試，不錯(cuò)過任何一個(gè)可疑樣本，針對可疑樣本，選用不同的試劑進(jìn)行復(fù)核確定，以防止“假陰性”的出現(xiàn)；其次，每進(jìn)行一批實(shí)驗(yàn)，均會(huì)隨機(jī)插入三個(gè)以上空白對照，針對陽性樣本會(huì)進(jìn)行病毒基因的測序比對，以防止“假陽性”的出現(xiàn)。

檢測后，定期隨機(jī)抽取檢測后的樣本送第三方實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測，對數(shù)據(jù)進(jìn)行對比分析，同時(shí)也參加衛(wèi)生主管部門和廣東省臨床中心的室間質(zhì)評，保障檢測的準(zhǔn)確性。

揭秘五：所向披靡

P3檢測團(tuán)隊(duì)目前有21人，實(shí)行一天三班制。在疫情非常時(shí)期，為了滿足檢測需求，縮短檢測時(shí)間，在原有團(tuán)隊(duì)基礎(chǔ)上，從風(fēng)濕免疫科、血液科等科室實(shí)驗(yàn)室調(diào)配增加人員。“偵察兵”的檢測團(tuán)隊(duì)70%以上是碩士以上學(xué)歷，均經(jīng)過分子生物學(xué)的培訓(xùn)和擁有PCR上崗證。

譽(yù)為“偵察兵”的檢測團(tuán)隊(duì)。

P3實(shí)驗(yàn)室主任林劍國，2002年獲得華中科技大學(xué)傳染病學(xué)專業(yè)醫(yī)學(xué)博士，分別在美國疾控中心、Emory大學(xué)、Saint Louis 大學(xué)從事病毒發(fā)病機(jī)制及疫苗研制等方面工作達(dá)14年，在高致病性病毒的處理及生物安全方面積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格遵照“新型冠狀病毒肺炎診療方案”及生物安全要求，檢測人員需在P3實(shí)驗(yàn)室負(fù)壓密閉的空間里穿著三級防護(hù)裝備，5個(gè)小時(shí)不吃不喝，甚至穿戴成人紙尿褲以解決上廁所的需要，隨時(shí)需要面對和克服因負(fù)壓差及嚴(yán)密裝備導(dǎo)致出現(xiàn)的頭暈、嘔吐等癥狀。

“他們與戰(zhàn)斗在病房里的醫(yī)護(hù)人員不同，他們藏在實(shí)驗(yàn)室里，每天與病毒近距離接觸，是別人看不見的‘最前線’。”廣東省第二人民醫(yī)院P3主任林劍國說。