反相HPLC色譜柱的推薦再生步驟
　　
　　1.取下色譜柱，然后重新連接到色譜儀上，讓液體/氣體反方向流過色譜柱。
　　
　　2.用HPLC級水沖洗掉鹽/緩沖液。以1毫升/分鐘的速度把25毫升水泵入色譜柱。

　　3.用25毫升異丙醇沖洗色譜柱。

　　4.用25毫升二氯甲烷沖洗色譜柱。

　　5.用25毫升正己烷沖洗色譜柱。

　　6.再次用25毫升二氯甲烷沖洗色譜柱。

　　7.用25毫升異丙醇沖洗色譜柱。

　　8.按正確的流動方向，把色譜柱重新連接到色譜上。用不含緩沖液的流動相沖洗色譜柱，然后重新倒入緩沖液。

　　9.用25到50毫升流動相平衡色譜柱。

　　10.注入標(biāo)準(zhǔn)物或樣品，檢查性能是否恢復(fù)。
　　
　　色譜柱的保養(yǎng)
　　
　　在正常情況下，色譜柱至少可以使用3—6個(gè)月，能完成數(shù)百次以上的分離。但是，若操作不慎，將使色譜柱很易損壞而不能使用。因此為了保持柱效、柱容量及滲透性，必須對色譜柱進(jìn)行仔細(xì)地保養(yǎng)。
　　
　　1．色譜柱極易被微小的顆粒雜質(zhì)培塞，使操作壓力速升高而無法使用，因此必須將流動相仔細(xì)地蒸餾或用0.45μm孔徑的濾膜過濾。在流動相組貯槽與色譜柱間，安裝0.45μm孔徑的過濾器。在柱子上端接頭處裝上多孔過濾片，以防止固體顆粒進(jìn)入色譜柱中。在水溶液流動相中，細(xì)菌容易生長，可能堵塞篩板加入0.01％NoHa能防止能防止細(xì)菌生長。
　　
　　2．最好使用進(jìn)祥閥進(jìn)樣，以防止注射器進(jìn)樣時(shí)、注射隔膜碎屑堵塞柱子入口。
　　
　　3．對硅膠基鍵合相填科，水溶液流動相的PH值不得超出2—8．5的范圍，使溫度不宜過高。柱子在酸性或堿性條件下使用之后，。應(yīng)依次用水、甲醇清洗，對暫時(shí)不用而需要較長時(shí)間保存的柱子，要用純甲清洗，柱子兩端用金屬螺帽封閉，保存于干凈的有機(jī)溶劑中。
　　
　　4．要防止色譜柱被振動或撞擊，否則柱內(nèi)填料床層產(chǎn)生裂縫和空隙，會使色譜峰出現(xiàn)“駝峰”或“對峰”。
　　
　　5．要防止流動相逆向流動，否則將使固定相層位移，柱效下降。
　　
　　6．使用保護(hù)柱。連續(xù)注射含有未被洗脫樣品時(shí)，會使柱效下降，保留值改變。為了延長柱壽命，在進(jìn)樣閥和分析柱間加上保護(hù)柱，其長度一般為3—5cm，填充與分析柱性質(zhì)相似的表面多孔型固定相，因此可干法填裝。而且價(jià)廉、更換容易。實(shí)驗(yàn)表明，使用保護(hù)柱后，除了使擴(kuò)為零的組分的塔板數(shù)減少外，其柱效下降很少。
　　
　　色譜柱的再生
　　
　　一般情況下，硅膠和ODS等化學(xué)鍵合固定相再生是困難的。有時(shí)，采用下述方法可能提高校效。
　　
　　1．由于雜質(zhì)微粒等因素，使柱上端固定相變色，柱效下降。這時(shí)，可仔細(xì)地將變色部分除去（約3mm左右），再補(bǔ)充新的固定香。
　　
　　2．當(dāng)色譜柱吸附未被洗脫成分時(shí)，柱效將明顯下降，可選擇合適的溶劑進(jìn)行洗凈。
　　
　　3．對離子交換樹脂柱，先經(jīng)1mol／LHCI相1molNaOH溶液洗凈，再以1—2mol/LNaCl水溶液平衡，以超聲波發(fā)生器進(jìn)行清洗，通?？色@良好的效果。
　　
　　4．當(dāng)采用梯度洗脫時(shí)，柱在重復(fù)使用前，用泵把幾倍于柱體積的起始溶劑壓經(jīng)柱子，以重新建立起始的平衡來得到再生。
　　　　
　　在高效液相色譜使用過程中故障排出時(shí)要遵守以下原則：一次只改變一個(gè)因素，從而確定假定因素與問題之間的聯(lián)系；如果通過更換組件來排查故障時(shí)要注意將拆下的完好組件裝回原位，從而避免浪費(fèi)；養(yǎng)成良好的記錄習(xí)慣，一個(gè)良好的記錄是成功地進(jìn)行故障排除的關(guān)鍵。
　　
　　總之，在使用高效液相色譜時(shí)一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養(yǎng)，儀器系統(tǒng)的干凈是用好儀器和維護(hù)維修儀器的關(guān)鍵。