LC-10T高效相色譜儀,VI2010S色譜數(shù)據(jù)處理軟件。甲醇(色譜純)，水為重蒸餾水，其它試劑為分析純。大黃酸對(duì)照品(供含量測(cè)定用，批號(hào)0757-9804)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。樣品常通口服液為南方醫(yī)院藥學(xué)部試制。

　　2色譜條件

　　VertexC18液相色譜柱(150×4.6mm,5μm)，流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸溶液85：15，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，流速為1ml·min-1。溫度：室溫20℃。在此條件下，大黃酸的保留時(shí)間約12min，與其它峰分開(kāi)。大黃酸對(duì)照品、常通口服液的高效液相色譜圖見(jiàn)圖1、2。圖1大黃酸標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖圖2常通口服液HPLC色譜圖

　　3線性關(guān)系考察

　　精密稱取大黃酸對(duì)照品0.00402g，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，制得對(duì)

　　照品儲(chǔ)備液，取儲(chǔ)備液適量，加流動(dòng)相制成1ml含201、4.02、8.04、12.06、20.10、40.20μg的對(duì)照品系列溶液，各依法進(jìn)樣20μl，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以大黃酸對(duì)照品濃度X為縱坐標(biāo)，峰面積Y(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程為：Y=9.534×10-6X 0.1934,相關(guān)系數(shù)r=1.0000。說(shuō)明進(jìn)樣量在0.0402-0.804μg范圍內(nèi),對(duì)照品濃度與峰面積呈線性關(guān)系。

　　3對(duì)照品溶液與供試品溶液的制備

　　對(duì)照品溶液的制備：精密移取大黃酸對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加流動(dòng)相稀釋為濃度為8.04μg/ml對(duì)照品溶液。

　　供試品溶液的制備：精密移取常通口服液10ml，加入1ml0.8%的磷酸溶液，加入甲醇定容至20ml，搖勻，離心10min，取上清液用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，即為供試品溶液。

　　空白溶液的制備：取除大黃的藥味按同一工藝制成的缺大黃空白樣品0.2ml，按供試品溶液制備方法操作，即得。

　　4精密度實(shí)驗(yàn)

　　精密吸取8.04μg/ml的對(duì)照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀,連續(xù)測(cè)定5次，大黃酸的平均峰面積為831543,RSD=0.18%(n=5)。表明結(jié)果精密度良好。

　　5穩(wěn)定性試驗(yàn)

　　精密吸取室溫保存的同一對(duì)照品溶液10μl,同法每間隔一定時(shí)間進(jìn)樣測(cè)定,共5次,結(jié)果表明供試品溶液在7天內(nèi)無(wú)明顯變化，表明此對(duì)照品基本穩(wěn)定,RSD=0.49%.

　　6重復(fù)性試驗(yàn)

　　取同一批常通口服液6份各10ml,依法測(cè)定,結(jié)果大黃酸含量的平均值為165.62,RSD=2.15%(n=6)。說(shuō)明方法重復(fù)性較好.