1、 基因敲除與基因敲除小鼠
所謂“基因敲除小鼠、基因敲除模式小鼠“，就是先在小鼠的胚胎干細(xì)胞上通過(guò)基因重組的辦法進(jìn)行基因修飾——將胚胎干細(xì)胞中的靶向基因改掉，然后將“修飾”后的胚胎干細(xì)胞植入小鼠的早期胚胎，生成嵌合體小鼠-基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠。這種嵌合體小鼠——基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠長(zhǎng)大后，體內(nèi)同時(shí)存在被“修飾”過(guò)的基因和未被“修飾”的基因。當(dāng)小鼠的生殖細(xì)胞恰巧被“修飾”過(guò)了，則它們就會(huì)生出基因完全被“修飾”過(guò)的基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠。
基因敲除（Gene knock-out），是建立在基因同源重組技術(shù)以及胚胎干細(xì)胞技術(shù)基礎(chǔ)上的一種新分子生物學(xué)技術(shù)。基因敲除技術(shù)是對(duì)一個(gè)結(jié)構(gòu)已知但功能未知的基因，從分子水平上設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，將該基因去除，或用其它順序相近基因取代，然后從整體觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，推測(cè)相應(yīng)基因的功能的一種技術(shù)。它克服了隨機(jī)整合的盲目性和偶然性，是一種理想的修飾、改造生物遺傳物質(zhì)的方法。這項(xiàng)技術(shù)的誕生可以說(shuō)是分子生物學(xué)技術(shù)上繼轉(zhuǎn)基因技術(shù)后的又一革命。尤其是條件性、誘導(dǎo)性基因打靶系統(tǒng)的建立，使得對(duì)基因靶位時(shí)間和空間上的操作更加明確、效果更加精確、可靠，它的發(fā)展將為發(fā)育生物學(xué)、分子遺傳學(xué)、免疫學(xué)及醫(yī)學(xué)等學(xué)科提供了一個(gè)全新的、強(qiáng)有力的研究、治療手段，具有廣泛的應(yīng)用前景和商業(yè)價(jià)值。
基因敲除除可中止某一基因的表達(dá)外，還包括引入新基因及引入定點(diǎn)突變。既可以是用突變基因或其它基因敲除相應(yīng)的正?；?，也可以用正?；蚯贸鄳?yīng)的突變基因。
2、北京百奧賽圖基因生物技術(shù)有限公司基因敲除模式小鼠制備技術(shù)
3.1打靶載體的構(gòu)建
1.打靶載體的設(shè)計(jì)及構(gòu)建：打靶載體的設(shè)計(jì)及構(gòu)建是基因敲除小鼠、基因敲除模式小鼠開(kāi)發(fā)的第一步。是把目的基因和與細(xì)胞內(nèi)靶基因特異片段同源的DNA分子都重組到帶有標(biāo)記基因(如neo基因，TK基因等)的載體上，此重組載體即為打靶載體。因設(shè)計(jì)與開(kāi)發(fā)基因敲除小鼠、基因敲除模式小鼠目的不同，此載體有不同的設(shè)計(jì)方法，可分為替換性載體和插入型載體。如為了把某一外源基因引入染色體DNA的某一位點(diǎn)上，這種情況下應(yīng)設(shè)計(jì)的插入型載體要包括外源基因(即目的基因)、同源基因片段及標(biāo)記基因等部分。如為了使某一基因失去其生理功能，這時(shí)所要設(shè)計(jì)的替換型打靶載體，應(yīng)包括含有此靶基因的啟動(dòng)子及第一外顯子的DNA片段及標(biāo)記基因等諸成分。此外，還要對(duì)Southern轉(zhuǎn)染探針進(jìn)行設(shè)計(jì)、構(gòu)建、預(yù)實(shí)驗(yàn)及優(yōu)化等。
北京百奧賽圖基因生物技術(shù)有限公司具有獨(dú)特的、用于大片段DNA分子克隆技術(shù)并優(yōu)化了一套獨(dú)特的打靶載體構(gòu)建技術(shù)，該技術(shù)可以大大地提高打靶載體構(gòu)建速度，減少突變，同時(shí)易于胚胎干細(xì)胞重組和篩選等多重優(yōu)點(diǎn)。使得公司的基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠模型構(gòu)建速度大大加快。
3.2胚胎干細(xì)胞的電轉(zhuǎn)和培養(yǎng)
小鼠胚胎干細(xì)胞（Embryonic stemcell, ESC）是基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠制的關(guān)鍵材料。目前市場(chǎng)上供應(yīng)的ES細(xì)胞通常質(zhì)量很不穩(wěn)定，或是同源重組效率不高，或是不容易進(jìn)入種系傳代，難于滿足制備基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠的要求。實(shí)驗(yàn)室需要對(duì)ES細(xì)胞進(jìn)行系統(tǒng)的研究試驗(yàn)，才能找到重組率高，易傳代的ES細(xì)胞。我們公司自己研發(fā)并篩選C57BL/6遺傳背景的小鼠胚胎干細(xì)胞，所以可以直接得到C57BL/近交系模式小鼠，省去用129背景小鼠所需要的超過(guò)2年的回交時(shí)間。
將基因打靶載體通過(guò)電穿孔法導(dǎo)入同源的C57BL/6胚胎干細(xì)胞中，使外源DNA與胚胎干細(xì)胞基因組中相應(yīng)部分發(fā)生同源重組，將打靶載體中的DNA序列整合到內(nèi)源基因組中從而得以表達(dá)。可以極大地縮短科研時(shí)間（7-9個(gè)月，節(jié)約一半的時(shí)間），節(jié)省資金，及提高科研的競(jìng)爭(zhēng)力。由于其遺傳背景清晰，容易獲得重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

　3.3陽(yáng)性克隆的挑取和篩選：用選擇性培養(yǎng)基篩選已擊中的細(xì)胞：一般地，篩選使用正、負(fù)選擇法，比如用G418篩選所有能表達(dá)neo基因的細(xì)胞，然后用Ganciclovir淘汰所有HSV-TK正常表達(dá)的細(xì)胞，剩下的細(xì)胞為命中的細(xì)胞。將篩選出來(lái)的靶細(xì)胞導(dǎo)入鼠的囊胚中，再將此囊胚植人假孕母鼠體內(nèi)，使其發(fā)育成嵌合體小鼠。
3.4通過(guò)觀察基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠的生物學(xué)形狀的變化進(jìn)而了解目的基因變化前后對(duì)小鼠的生物學(xué)形狀的改變，達(dá)到研究目的基因的目的?；蚯贸∈?，基因敲除模式小鼠已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外科研機(jī)構(gòu)、醫(yī)藥企業(yè)、醫(yī)院進(jìn)行基礎(chǔ)研究的重要工具。