SYBR Green I Master Mix  

產品簡介：本產品為基于HotStart Taq Polymerase 的熒光檢測定量PCR即用反應液。 
1、使用簡便：除本品外，只需再加入樣品/引物/探針使成欲達體系即可開始使用。 

2、廣泛的應用性： 可用于MJ/BIO-RAD 儀器 

3、可實施熱啟動PCR：  本產品內含優(yōu)質高效的熱啟動Taq 酶，無需特別操作即可進行熱啟動PCR。

 
●試劑盒特長
1． 適用于Real Time PCR反應，可以快速正確地對目的基因進行檢測、定量。

2． 在1×濃度的Premix中，預先混有SYBR GreenI，PCR反應液配制時，只需加入模板、引物、滅菌蒸餾水便可進行Real Time PCR反應，操作簡單方便。
 
●操作注意
1． 凍結制品融解后請上下顛倒輕輕均勻混合，避免振蕩器等劇烈攪拌?；靹蛑破泛笳堄秒x心機輕微離心后使用。

2． 本制品使用前請于-20℃保存，融解后的制品請于冰上放置，使用后請立即保存于-20℃。注意：使用及保存均需避光。

3． 盡量避免多次反復凍融，如果需要多次使用時，請在第一次融解后將制品按適當量分裝后保存。

4． 本制品中含有熒光染料SYBR Green I，保存制品時或配制PCR反應液時請避免強光照射。

5． 反應液的配制、分裝請一定使用新的（無污染的）槍頭、Microtube等，盡量避免污染。
 
●Real Time PCR操作順序
1． 溶解試劑，上下顛倒混勻，確認溶液完全溶解。
注）避免用振蕩器混勻，劇烈振蕩會降低制品性能。
以下操作請在冰上進行，長時間室溫放置會降低制品性能。 

2． 配制PCR反應用混合液，分裝至PCR反應管中。

3． 添加PCR擴增用模板。

4． 使用Real Time PCR擴增儀，進行PCR擴增反應。

注）1. 反應液配制方法和PCR擴增條件請參照使用方法。
    2. Real Time PCR儀的使用方法，請參照各種儀器說明書。
   
    
●使用方法
A）應用ABI PRISM 7000，7700，7900 Real Time PCR擴增儀的使用方法
※ 請按照ABI PRISM?（Applied Biosystems公司）的使用說明書要求進行實驗操作。

1． 按下列組份配制PCR反應液（反應液配制請在冰上進行）。
PCR mix                 46.0μL
上游引物                  1.0μL
下游引物                  1.0μL
模板                         2.0μL
 
注意：1）、通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結果。反應性能較差時，可以在0.1～1.0μM范圍內調整引物濃度。
2）、DNA模板的添加量通常在100 ng以下。因不同種類的DNA模板的溶液中含有的靶基因的拷貝數(shù)不同，必要時可進行梯度稀釋，確定最佳的DNA模板添加量。

2. 進行Real Time PCR反應。
建議采用兩步法PCR反應程序，如果該程序得不到良好的實驗結果時，再進行PCR條件的優(yōu)化。由于使用Tm值較低的引物等原因，兩步法PCR反應擴增性能較差時，可以嘗試進行三步法PCR擴增反應。
 
B）應用Light Cycler Real Time PCR擴增儀的使用方法
※ 請按照LightCycler?（Roche Diagnostics公司）的使用說明書要求進行實驗操作。
 
1．按下列組份配制PCR反應液（反應液配制請在冰上進行）。
  
PCR mix                  16.0μL
上游引物                  1.0μL
下游引物                  1.0μL
模板                         2.0μL
 
注意：*1、通常引物終濃度為0.2μM可以得到較好結果。反應性能較差時，可以在0.1～1.0μM范圍內調整引物濃度。
*2、DNA模板的添加量通常在100 ng以下。因不同種類的DNA模板的溶液中含有的靶基因的拷貝數(shù)不同，必要時可進行梯度稀釋，確定最佳的DNA模板添加量。
 
2. 進行Real Time PCR反應。

PCR反應用毛細管請用離心機輕輕離心后放入Light Cycler中進行Real Time PCR反應。建議采用兩步法PCR反應程序，如果該程序得不到良好的實驗結果時，再進行PCR條件的優(yōu)化。由于使用Tm值較低的引物等原因，兩步法PCR反應擴增性能較差時，可以嘗試進行三步法PCR擴增反應。
 
 
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