制備凝膠懸浮液 
Sephadex  LH-20在使用之前必須進(jìn)行溶脹。在溶脹的過(guò)程中，要盡量避免過(guò)分?jǐn)嚢?，否則會(huì)破壞球形膠粒，且要避免使用磁力攪拌器。
1．  在室溫下，將凝膠溶脹于層析溶劑中至少三小時(shí)，溶脹后膠體積的大小決定于所使用的溶劑系統(tǒng)，請(qǐng)參考后頁(yè)之干膠溶脹表計(jì)算特定柱體積所需要干膠的量。
2．  使溶脹膠體積沉淀之后占總體積的75%，上層溶劑占25%，這時(shí)，懸浮液從一個(gè)容器倒入另一容器時(shí)膠?？梢苿?dòng)。
3．  將溶脹后的凝膠根據(jù)裝柱要求均勻倒入柱內(nèi)，在保證膠粒不變形的前提下，應(yīng)在盡可能高的壓力下裝柱，反壓不要超過(guò)1.5ba。 
平衡 
上樣前，用洗脫液平衡層析柱至少兩個(gè)柱體積直到基線變得平穩(wěn)為止，如改變?nèi)軇?yīng)該注意凝膠在新溶劑中的溶脹性質(zhì)，并根據(jù)性質(zhì)確定柱高調(diào)節(jié)器的位置，如使用相同的溶劑，在以后的層析中柱平衡可以省略。 
洗脫液 
為確保延長(zhǎng)層析柱的使用壽命，所有的緩沖液都應(yīng)該離心或經(jīng)過(guò)0.45um的膜過(guò)濾以除去雜質(zhì)。 
樣品 
樣品體積應(yīng)該占柱總體積的1-2%，同樣在使用之前樣品應(yīng)該離心或經(jīng)過(guò)0.45um的膜過(guò)濾。 
洗脫 
洗脫流速應(yīng)根據(jù)情況而定，zui大張性流速約12cm/min（反壓1.5ba），建議流速為1-10cm/h。總體來(lái)說(shuō)，較低的流速，具有較高的分辯率。