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研究人員通常會在下游分析中遭遇DNA樣本量有限或不足的問題。QIAGEN的全基因組擴增技術通過以包括單細胞在內的小量樣本或珍貴樣本擴增獲得基因組DNA，解決此類難題。REPLI-g Kit能夠準確地復制原始DNA樣本，不會造成偏差，擴增后的DNA可以直接應用于廣泛的遺傳學分析。 什么是全基因組擴增(whole gemome amplification)？ 基于PCR的WGA技術 基于PCR的WGA技術主要有兩種：簡并寡核苷酸PCR (DOP-PCR)技術(1)和擴增前引物延伸(PEP)技術(2)。這兩種技術之間的主要區(qū)別在于PEP技術使用隨機引物和低PCR退火溫度，而DOP-PCR技術則使用半簡并寡核苷酸（例如CGACTCGAGNNNNNNATGTGG）和更高的退火溫度。兩種方法中都使用了Taq DNA聚合酶，使得擴增長度限制在3 kb（平均片段長度為400–500 kb）以內，并且會在擴增序列中引入一些錯誤。不僅如此，有研究發(fā)現(xiàn)這些技術的基因組覆蓋度不夠完整，并會在擴增中產(chǎn)生偏向性——由于引物優(yōu)先結合某些特定區(qū)域，造成DNA擴增產(chǎn)物中的一些序列相對增多。 多重置換擴增的WGA技術 REPLI-g使用了稱為多重置換擴增(MDA)的恒溫基因組擴增技術，該技術包含了隨機六聚體與變性DNA的結合過程，以及使用Phi 29聚合酶在恒定溫度下進行的鏈置換合成過程。每個置換鏈上添加引物后，形成分枝狀的DNA結構網(wǎng)絡。Phi 29聚合酶不會從基因組DNA模板上面解離下來，這使得生成的無偏差DNA片段可延伸至100 kb。該酶還具有3’端→5’端的外切酶校正活性，相比基于Taq DNA聚合酶的方法，能夠提供高達1000倍的保真度（參見上述基于PCR的WGA技術）。Phi 29聚合酶由獨特的REPLI-g優(yōu)化緩沖液進行支撐，能夠方便的克服如發(fā)卡環(huán)一類的二級結構困難，在擴增過程中避免滑脫、定制和聚合酶解離等現(xiàn)象的發(fā)生。這樣無偏差的DNA片段能夠合成至100 kb的長度。 | |
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MDA技術與基于PCR的WGA方法相比的優(yōu)勢 傳統(tǒng)的基因組DNA擴增方法包括費時的EBV轉化細胞系建立過程，以及之后使用隨機或簡并寡核苷酸引物進行的PCR全基因組擴增步驟。為其他廠商所普遍采用的基于PCR的WGA法，也會產(chǎn)生非特異性的擴增干擾以及不完全的位點覆蓋度。某些案例中可能生成短于1 kb長度的DNA片段，在很多后續(xù)應用中無法使用。通常情況下，由于使用了低保真度的Taq DNA聚合酶，使生成的DNA中包含了很高的堿基突變率，因此形成了容易出錯的擴增，導致如單堿基對突變、STR縮短和擴張等不良后果的發(fā)生。REPLI-g則沒有這些缺點，它能對整個基因組進行高度均一的擴增，反應過程中位點序列的偏差及突變率達到最小。 |
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WGA技術的應用
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TDLA是一種高精密儀器，可識別出氣體混合物中的甲烷、水汽、二氧化碳等組分，同時測出這些組分的濃度，而且可達到很低的檢測限。TDLA工業(yè)涉及分析化學、過程化學、過程工程、多元數(shù)據(jù)分析等多種學科。TDLA技術已應用于多種場合，如硫回收裝置、煉油廠加熱器、焚燒、排放監(jiān)測、電弧爐、脫硝裝置和各種用途的鍋爐中的氣體分析和天然氣、溫室氣體、肥料(尿素)、清潔氣體等氣體分析。
這份報告從行業(yè)、應用和地理位置三個維度對TDLA的市場進行了分析。TDLA涉及的行業(yè)包括化工、電力、石油天然氣、紙漿和造紙、化肥、水泥、金屬和環(huán)境產(chǎn)業(yè)。TDLA在尾氣、合成氣、煉油廠燃料氣、天然氣、溫室氣體、火炬氣、肥料揮發(fā)氣體、肥料(尿素)、煤氣、清潔氣體、堿性氧氣轉爐氣等氣體檢測和硫回收、煉油廠加熱器、核能、焚燒、催化裂解裝置、排放監(jiān)測、電弧爐、脫硝裝置、焦爐炭黑生產(chǎn)、鍋爐等設備中相關氣體分析中都有應用。目前應用地區(qū)覆蓋北美、南美、歐洲、亞太地區(qū)及其他地區(qū)。
TDLA市場增長主要源于排放監(jiān)測和焚燒監(jiān)測的需求，集中在石油天然氣、金屬、水泥和電力行業(yè)。新興經(jīng)濟體的發(fā)展需求是TDLA市場增長的重要機會。
TDLA的主要供應商有德國西門子、瑞士ABB、(德國)、梅特勒-托萊多、日本橫河、英國Servomex、挪威NeoMonitors、瑞士Endress+Hauser集團、德國西克麥哈克等。
