Sephadex LH20的分離原理是根據(jù)分子大小，主要有兩方面：以凝膠過(guò)濾作用為主，兼具反相分配的作用（在反相溶劑中）。因?yàn)槟z過(guò)濾作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脫下來(lái)，小分子的化合物保留強(qiáng)，最后出柱（具體原理可參見(jiàn)分子篩層析）。如果使用反相溶劑洗脫， Sephadex LH20對(duì)化合物還起反相分配的作用，所以極性大的化合物保留弱，先被洗脫下來(lái)，極性小的化合物保留強(qiáng)，后出柱。如果使用正相溶劑洗脫，這主要靠凝膠過(guò)濾作用來(lái)分離。