1、 基因敲除與基因敲除小鼠
所謂“基因敲除小鼠、基因敲除模式小鼠“，就是先在小鼠的胚胎干細胞上通過基因重組的辦法進行基因修飾——將胚胎干細胞中的靶向基因改掉，然后將“修飾”后的胚胎干細胞植入小鼠的早期胚胎，生成嵌合體小鼠-基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠。這種嵌合體小鼠——基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠長大后，體內同時存在被“修飾”過的基因和未被“修飾”的基因。當小鼠的生殖細胞恰巧被“修飾”過了，則它們就會生出基因完全被“修飾”過的基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠。
基因敲除（Gene knock-out），是建立在基因同源重組技術以及胚胎干細胞技術基礎上的一種新分子生物學技術。基因敲除技術是對一個結構已知但功能未知的基因，從分子水平上設計實驗，將該基因去除，或用其它順序相近基因取代，然后從整體觀察實驗動物，推測相應基因的功能的一種技術。它克服了隨機整合的盲目性和偶然性，是一種理想的修飾、改造生物遺傳物質的方法。這項技術的誕生可以說是分子生物學技術上繼轉基因技術后的又一革命。尤其是條件性、誘導性基因打靶系統(tǒng)的建立，使得對基因靶位時間和空間上的操作更加明確、效果更加精確、可靠，它的發(fā)展將為發(fā)育生物學、分子遺傳學、免疫學及醫(yī)學等學科提供了一個全新的、強有力的研究、治療手段，具有廣泛的應用前景和商業(yè)價值。
基因敲除除可中止某一基因的表達外，還包括引入新基因及引入定點突變。既可以是用突變基因或其它基因敲除相應的正?；颍部梢杂谜；蚯贸鄳耐蛔兓?。
2、北京百奧賽圖基因生物技術有限公司基因敲除模式小鼠制備技術
3.1打靶載體的構建
1.打靶載體的設計及構建：打靶載體的設計及構建是基因敲除小鼠、基因敲除模式小鼠開發(fā)的第一步。是把目的基因和與細胞內靶基因特異片段同源的DNA分子都重組到帶有標記基因(如neo基因，TK基因等)的載體上，此重組載體即為打靶載體。因設計與開發(fā)基因敲除小鼠、基因敲除模式小鼠目的不同，此載體有不同的設計方法，可分為替換性載體和插入型載體。如為了把某一外源基因引入染色體DNA的某一位點上，這種情況下應設計的插入型載體要包括外源基因(即目的基因)、同源基因片段及標記基因等部分。如為了使某一基因失去其生理功能，這時所要設計的替換型打靶載體，應包括含有此靶基因的啟動子及第一外顯子的DNA片段及標記基因等諸成分。此外，還要對Southern轉染探針進行設計、構建、預實驗及優(yōu)化等。
北京百奧賽圖基因生物技術有限公司具有獨特的、用于大片段DNA分子克隆技術并優(yōu)化了一套獨特的打靶載體構建技術，該技術可以大大地提高打靶載體構建速度，減少突變，同時易于胚胎干細胞重組和篩選等多重優(yōu)點。使得公司的基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠模型構建速度大大加快。
3.2胚胎干細胞的電轉和培養(yǎng)
小鼠胚胎干細胞（Embryonic stemcell, ESC）是基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠制的關鍵材料。目前市場上供應的ES細胞通常質量很不穩(wěn)定，或是同源重組效率不高，或是不容易進入種系傳代，難于滿足制備基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠的要求。實驗室需要對ES細胞進行系統(tǒng)的研究試驗，才能找到重組率高，易傳代的ES細胞。我們公司自己研發(fā)并篩選C57BL/6遺傳背景的小鼠胚胎干細胞，所以可以直接得到C57BL/近交系模式小鼠，省去用129背景小鼠所需要的超過2年的回交時間。
將基因打靶載體通過電穿孔法導入同源的C57BL/6胚胎干細胞中，使外源DNA與胚胎干細胞基因組中相應部分發(fā)生同源重組，將打靶載體中的DNA序列整合到內源基因組中從而得以表達?？梢詷O大地縮短科研時間（7-9個月，節(jié)約一半的時間），節(jié)省資金，及提高科研的競爭力。由于其遺傳背景清晰，容易獲得重復性好的實驗結果。

　3.3陽性克隆的挑取和篩選：用選擇性培養(yǎng)基篩選已擊中的細胞：一般地，篩選使用正、負選擇法，比如用G418篩選所有能表達neo基因的細胞，然后用Ganciclovir淘汰所有HSV-TK正常表達的細胞，剩下的細胞為命中的細胞。將篩選出來的靶細胞導入鼠的囊胚中，再將此囊胚植人假孕母鼠體內，使其發(fā)育成嵌合體小鼠。
3.4通過觀察基因敲除小鼠，基因敲除模式小鼠的生物學形狀的變化進而了解目的基因變化前后對小鼠的生物學形狀的改變，達到研究目的基因的目的?；蚯贸∈?，基因敲除模式小鼠已經成為國內外科研機構、醫(yī)藥企業(yè)、醫(yī)院進行基礎研究的重要工具。